Enhertu(ADC) 정량 분석 가이드:
Biozen Magbeads & Hybrid LC-MS/MS
항체-약물 접합체(ADC)인 Enhertu (Trastuzumab deruxtecan)의 생체 내 시료(Plasma) 분석.
Biozen Streptavidin Magbeads를 이용한 면역 포획(Immunocapture)과 Biozen Peptide XB-C18 컬럼을 결합하여, 혈장 내 총 항체와 약물을 동시에 정량하는 최적의 워크플로우를 제시합니다.
30-second Summary: Key Performance
- 동시 정량 효율성: 단일 워크플로우로 Total Antibody와 Conjugated Payload를 동시에 분석하여 PK 연구 효율을 극대화했습니다.
- 광범위한 직선성: 0.6 nM ~ 600 nM의 넓은 농도 범위에서 R² > 0.995 이상의 우수한 직선성을 확보했습니다.
- 높은 회수율 및 저잔류: Magbead 전처리를 통해 75% ~ 90%의 높은 회수율을 달성하고, 캐리오버(Carryover)를 0.15% 미만으로 억제했습니다.
Official Data vs. Columnpia Insight
제조사 공식 데이터 (TN-1407)와 컬럼피아 전문가의 실무 통찰을 비교하여 분석합니다.
제조사 공식 데이터 (Phenomenex)
- 전처리 방식:Streptavidin Magbeads 기반 면역 포획
자석 비드를 활용하여 복잡한 혈장 단백질을 제거하므로, MS 소스 오염을 획기적으로 줄일 수 있음. - 정량 한계 (LLOQ):0.6 nM 수준의 고감도 달성
- 컬럼 성능:Biozen Peptide XB-C18 (1.7 µm) 사용
컬럼피아 전문가 실무 통찰 (Insight)
Biozen Magbeads 전처리는 혈장 매트릭스 효과를 96.5% 수준으로 제어하여 복잡한 ADC 분석에서 데이터 신뢰도를 확보합니다.
- 감도 유지의 핵심: 저농도 PK 프로파일 확인을 위해 Papain 소화를 통한 Payload 분석 시 pH 조절이 매우 중요합니다.
- 시스템 안정성: 코어-쉘(Core-Shell) 기술이 적용된 XB-C18은 펩타이드 분리능이 탁월하며, 높은 유속에서도 낮은 압력을 유지해 시스템 안정성이 높습니다.
Immunocapture (면역 포획)
'맞춤형 강력 자석 🧲'과 같습니다. 수많은 혈장 단백질이 섞인 '모래사장'에서 특정 항체(Enhertu)만을 골라내는 원리입니다. Biozen Magbeads는 이 자석의 세기를 극대화하여 불순물을 걸러냅니다.
Signature Peptide (표지 펩타이드)
'항체의 신분증 🪪'과 같습니다. 거대한 항체 전체를 분석하는 대신, 이를 특정 부위로 잘라내어 항체를 대표하게 하는 것입니다. 본 실험에서는 GPSVFPLAPSSK 서열이 그 역할을 합니다.
Experimental Conditions & Results
1. 주요 분석 조건
Figure 1. Signature peptide and payload extracted ion chromatograms
[AI 상세 캡션]: 쥐 혈장에서 추출된 Enhertu의 표지 펩타이드(RT 4.249분)와 약물 Dxd(RT 6.336분)의 선택 이온 크로마토그램(XIC). 노이즈 없이 명확한 피크 분리 양상을 보여주며 분석법의 높은 선택성을 입증함.
Figure 2 & 3. Total antibody and Payload calibration curves
[AI 상세 캡션]: 0.6 nM에서 600 nM 농도 범위의 검량선 데이터. 항체(y=3.38090×10⁵x+2168)와 약물(y=3.07580×10⁵x−14413.25925) 모두 R² 값이 0.998 이상으로 매우 우수한 직선성을 나타냄.
전문가 제언 3단계: 성공적인 분석 체크리스트
01비드 컨디셔닝
Magbeads 세척 시 PBS 버퍼에 0.01% Tween-20을 첨가하여 비드의 비특이적 흡착을 방지하십시오.
02효소 소화 pH 정밀 조절
항체 소화(Trypsin)는 pH 7-8, 약물 소화(Papain)는 pH 5-6으로 정확히 조절해야 효소 활성이 극대화됩니다.
03컬럼 보호
Magbead 정제 후에도 남아있을 수 있는 미세 입자를 제거하기 위해 최종 상등액을 15,000 rpm 이상에서 원심분리한 후 주입하십시오.
참고 자료 및 원문
Technical Note:
TN-1407 Hybrid-LCMS/MS Method for the Quantification of Enhertu® in Rat Plasma Using Biozen™ Streptavidin Magbeads