[실전 가이드] mAb Intact Mass 분석:
선택성 향상 및 MS 데이터 품질 최적화
Biozen WidePore C4를 활용한 불순물 분리 및 질량 분석 정밀도 최적화 전략
30-second Summary
- 미세 선택성(Selectivity): NIST mAb 불순물 분리능에서 명확한 차이 발생.
- 데이터 무결성 확보: 경쇄(Light Chain) 불순물을 베이스라인 분리하여 MS 스펙트럼 중첩 차단.
- 이동상 적응력: TFA(UV) 및 Formic Acid(MS) 조건 모두에서 높은 안정성 제공.
* Biozen 제품군에는 HIC 모드가 포함되지 않습니다.
Manufacturer Data vs Practical Insight
단순한 스펙 나열이 아닙니다. 실무 환경에서 마주하는 변수와 그에 대한 해결책을 비교 분석합니다.
제조사 공식 데이터 (Spec)
- Core-Shell Technology: 고효율 분리
- WidePore Surface: 거대 분자 확산 최적화
- Applicability: Rituximab & NIST mAb
컬럼피아 실무 인사이트 (Impact)
- MS 데이터 품질 결정: 변이체 피크가 섞이면 Deconvolution 정확도 하락.
- 미세 소수성 차이 구별: NIST mAb 불순물과 같은 난분리 물질에서 진가 발휘.
- R&D 및 QC 최적화: 정밀 구조 분석과 루틴 모니터링 모두 충족.
A선택성 (Selectivity)
마치 '서로 다른 모양의 열쇠'와 같습니다. 같은 C4 컬럼이라도 기공의 크기와 화학적 성질이 다르면, 특정 단백질 조각(불순물)이라는 문을 더 잘 열어(분리해)낼 수 있습니다.
B스펙트럼 중첩 (Spectral Overlap)
라디오 채널 두 개가 겹쳐 들리는 현상과 비슷합니다. 액체 크로마토그래피에서 두 물질이 충분히 떨어지지 않으면, 질량 분석기(MS)에서 두 물질의 신호가 뒤섞여 정확한 질량을 알기 어렵게 됩니다.
Experimental Data
Experimental Conditions
| 항목 | LC-UV 조건 (Rituximab) | LC-MS 조건 (NIST mAb) |
|---|---|---|
| Column | bioZen 2.6 µm WidePore C4 | bioZen 2.6 µm WidePore C4 |
| Mobile Phase A | 0.1% TFA in Water | 0.1% Formic Acid in Water |
| Mobile Phase B | 0.1% TFA in ACN | 0.1% Formic Acid in ACN |
| Temperature | 60°C | 80°C |
| Flow Rate | 0.8 mL/min | 0.3 mL/min |
Figure 1. Comparison of BIOshell™ IgG C4 with bioZen™ WidePore C4
[AI 상세 캡션]: Rituximab 분석 시 bioZen WidePore C4와 BIOshell IgG C4 간의 LC-UV 크로마토그램 비교. 두 컬럼 모두 유사한 유지 시간과 피크 형태를 보이며 양호한 성능을 나타냅니다.
Figure 2. Intact LC-MS analysis of NIST mAb
[AI 상세 캡션]: NIST mAb Intact Mass 분석 결과. (좌) bioZen WidePore C4는 불순물을 성공적으로 분리하지만, (우) 비교 컬럼은 분리능 부족으로 인해 MS 데이터에서 스펙트럼 중첩(Spectral Overlap)이 발생하여 정확한 데이터 확보가 어렵습니다.
🔍 데이터 해석 및 실무 제언
실험 결과, Rituximab과 같은 일부 mAb에서는 컬럼 간 차이가 미미할 수 있으나, NIST mAb 사례처럼 불순물(경쇄 등)이 본 피크와 인접하여 용출되는 경우 bioZen WidePore C4의 독보적인 선택성이 빛을 발합니다. 베이스라인 분리가 이루어지지 않으면 MS 스펙트럼 상에서 신호가 겹쳐 정량 및 정성 분석의 신뢰도가 크게 떨어질 수 있습니다.
전문가 제언 (Expert's Note)
01기공 크기(Pore Size) 최적화
큰 단백질 분자가 컬럼 고정상 내부로 자유롭게 출입할 수 있도록 WidePore 구조를 채택했는지 확인하십시오.
02이동상 조성의 선택
감도를 중시하는 MS 분석에는 Formic Acid를, 피크 모양과 분리능을 우선시하는 UV 분석에는 TFA를 적절히 활용하되 bioZen의 높은 화학적 내성을 신뢰하십시오.
03온도 제어
mAb 분석 시 확산을 줄이고 회수율을 높이기 위해 60~80°C의 고온 조건을 설정하는 것이 유리합니다.
참고 자료 및 원문
Improving Selectivity for Intact Mass Spectrometry of Biotherapeutic mAbs
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