물리화학적 특성(Log P, pKa) 기반
HPLC/LC-MS 초기 조건 설정 가이드
더 이상 시행착오(Trial & Error)에 의존하지 마십시오. Columnpia는 분석 성분의 물리화학적 특성(Log P, pKa, 수소결합 수 등)을 기반으로 체계적으로 접근하여, 단 5 ~ 10분 이내에 최적의 HPLC/LC-MS 초기 조건을 설정하는 솔루션을 제공합니다.
2. 분석법 개발 6단계 프로세스 (6-Step Workflow)
화합물의 특성 데이터를 확보한 후, 다음 6가지 항목을 순서대로 결정하면 실패 확률을 최소화할 수 있습니다.
1모드 결정
Log P/Log D 값을 기준으로 역상(RP), HILIC, 또는 이온 교환(IEX) 선택.
2고정상 결정
화합물의 수소결합 능력과 상호작용할 수 있는 컬럼 선택 (예: Polar C18, Phenyl 등).
3이동상 pH 결정
pKa 값을 고려하여 이온화 상태 제어 (MS 감도 또는 UV 피크 모양 고려).
4유기용매 선택
분리 효율(Acetonitrile) vs 용출력(Methanol) 고려.
5용출 방식
Gradient(기울기) vs Isocratic(등용매) 결정.
6온도 설정
분리능과 배압을 고려한 온도 최적화.
3. [사례 연구 1] LC-MS/MS를 이용한 카테콜아민 분석 (Case Study)
대상 성분: Epinephrine, Norepinephrine, Dopamine (친수성 강함)
A. 화합물의 물리화학적 특성 (Dopamine 기준)
- Log P (Log D @ pH 3): -2.25 (강한 친수성)
- pKa: Acidic 9.99, Basic 9.31
- Hydrogen Bond Donor: 4개 / Acceptor: 3개
B. 초기 조건 설정 논리 (Decision Logic)
- 모드/고정상: Log P -2.25로 일반 C18에서는 머무름이 부족함.
➔ 솔루션: 수소결합(Donor 4개)을 활용하기 위해 수소 수용체 작용기가 있는 Luna Omega Polar C18 선택.
- 이동상 pH: MS 검출 감도를 위해 pH 3 (0.1% Formic acid) 선택.
- 유기용매: 분리 효율이 좋은 Acetonitrile.
- 결과: 역상 모드에서도 친수성 성분의 충분한 머무름과 분리 확보.
4. [사례 연구 2] HPLC/UV를 이용한 카테콜아민 분석 (Case Study)
대상 성분: Dopamine, Epinephrine
A. 초기 조건 설정 논리 (Decision Logic)
- 모드/고정상: MS와 달리 버퍼 사용이 자유로움. 친수성 성분의 머무름을 극대화하기 위해 100% 수용성 이동상 조건 선택.
➔ 솔루션: 100% 물에서도 상 붕괴(Phase Collapse)가 없고, 염기성 화합물의 피크 꼬림을 막아주는 Kinetex PS C18 (Positive Surface) 또는 Polar C18 선택.
- 이동상 pH: 이온 페어 효과를 위해 20mM Potassium Phosphate (pH 2.5) 사용.
- 유기용매: 머무름 확보를 위해 유기용매 0% (Buffer 100%) 설정.
- 결과: 100% 수용성 조건에서도 안정적인 베이스라인과 예리한 피크 모양 달성.
5. 추가 고려사항 및 도움말 (Resources)
Q. Polar C18 외에 다른 대안은 없나요?
A. 친수성 성분의 머무름을 높이기 위해 다음을 고려할 수 있습니다.
- HILIC 모드: Luna Omega Sugar (Amino/Amide 작용기)
- Phenyl 계열: Kinetex F5, Biphenyl (Pi-Pi 상호작용 및 수소결합 활용)
[전문가 서비스]
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