화합물의 물리화학적 특성에 기반한 빠른
초기 조건 설정

실제 사례 1: 이온화 그룹을 포함한 친수성 카테콜아민 분석 안내문

컬럼 분석을 위한 화합물의 Dopamine의 기본적인 물리화학적 특성 확인

• MW: 153.181 g/mol
• Hydrogen bond donor count: 4
• Hydrogen bond acceptor count: 3
• Strongest acidic pKa: 9.99
• Strongest basic pKa: 9.31
• Log P (Log D _ pH 3): -2.25
• Log P (Log D _ pH 9.7): 0.16

초기 조건 세팅 항목

1. 모드 결정
2. 고정상 결정
3. 이동상 pH 결정
4. 유기용매 선택
5. 그래디언트 vs. 아이소크라틱
6. 온도

각 세부 항목 결정 방법

1. 모드 결정

컬럼 내 머무름을 전제로 모드 결정 _ 역상(가능하면 익숙하고 대표적인 역상 검토), Log D 값 기준 – 2.25 ~ 0.16 으로 친수성이 강함, 다른 모드도 검토 필요

2. 고정상 결정

1. 역상 기준 검토
2. Log P (Log D _ pH 3)으로 -2.25 역상 머무름 부족 예상
3. 머무름 확보 위해 TMS C18 대신 Polar C18 검토
4. 시료 성분과 Polar C18의 상호작용(인력)을 강화하기 위해 수소결합 검토
5. 시료 성분의 Hydrogen bond donor count: 4 로 수소 제공이 더 강함
6. 상호작용을 위해 컬럼의 Polar 작용기는 수소를 받는 역할로 선별
7. Luna Omega Polar C18의 Polar 작용기는 수소를 받는 수소결합 구조로 적합

3. 이동상 pH 결정

MSMS 검출에 적당한 pH 3(0.1 % formic acid)

4. 유기용매 결정

분리 효율이 좋은 Acetonitrile 선택

5. 그래디언트 vs. 아이소크래틱

그래디언트( B % 0 ~ 90) 설정

6. 온도 결정

상온 등온 설정

결론

LC/MSMS 분석에서 역상 모드, 고정상 Luna Omega Polar C18, 이동상 pH 3, 유기용매 Acetonitrile, 그래디언트( B % 0 ~ 90), 컬럼온도 상온으로 최종 스타팅 조건 설정

대안 고려 사항

1. HILIC 모드로 친수성이 큰 성분의 머무름 확보

HILIC 모드, Luna Omega Sugar(아미노와 아마이드 폴리올 작용기)

2. 역상에서 친수성이 큰 성분의 머무름 확보

Phenyl 작용기의 L11 컬럼, Kinetex F5(PFP) 또는 Kinetex Biphenyl
아로마틱 링에 대한 인력과 수소 결합 작용기 효과 고려

3. 친수성이 강한 이온화 그룹(아민그룹) 대상으로 이온페어 TMS C18 고려

(단 UV 검출 조건에 제한됨)

최종 판단

1. 위의 Luna Omega Polar C18 역상에서 머무름 확보 시 최종 선택
2. 만약 인접한 두 성분의 분리도 중요하다면 두 성분의 구조적 차이를 기반으로 선택성 선택
   예: 이중결합의 개수 차이, -OH 그룹의 개수 차이 경유 Kinetex Biphenyl 머무름 분리 모두 강화로 특히 친수성 대사체 분리 분석에 장점
3. 여러 역상 조건에서 머무름 분리 부족 시 HILIC 모드로 전환.

추가 의문 사항

1. 친수성이 강한 유기산 분석에도 동일한 적용이 가능한가?
2. 컬럼 선택에서 유기산과 도파민의 구조적 차이는 무엇인가?
3. 왜 수소결합의 컨트롤이 친수성 유기물 컬럼 분석에 핵심 키워드 인가?

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온라인 세미나 - LC Method Development Based on Physicochemical Properties of Analyte (Log P, Log D, pKa etc.)