Hyphenating Size Exclusion Chromatography to High Resolution Mass Spectrometry - NIST mAb.PDF

분야: 바이오제약

소개

크기 배제 크로마토그래피(SEC)는 용액 내에서 생물분자의 크기에 따라 분리하는 기술이며, 특히 사이즈 변이체와 고분자량 집합체의 정량화에 유용하다. SEC를 고해상도 질량 분석법(HRMS)과 결합하면 바이오로직스의 특성을 캐릭터라이징할 수 있다. 이 문서에서는 NIST mAb RM 8671을 대표하는 표준 단일클론항체에 대해 SEC-HRMS를 사용한 분석 방법을 설명한다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen™ 1.8 µm dSEC-2, 200 Å
• Dimensions: 150 x 2.1 mm
• Part No.: 00F-4787-AN
• 이동상 (Mobile Phase): 200 mM Ammonium Acetate
• 유속 (Flow Rate): 90 µL/min
• 주입량 (Injection Volume): 2.5 µL
• 온도: 25 °C
• 검출기 (Detection): HRMS
• 샘플 (Sample): NIST mAb RM 8671, 10 mg/mL

핵심 기술 요소

• SEC-HRMS는 단일클론항체의 고차 구조(HOS)를 특성화하는 데 유용하다.
• 총 이온 크로마토그램(TIC)에서 우수한 피크 형태가 관찰되며, 짧은 길이의 컬럼(150 mm)을 사용하여 저분자량 프래그먼트도 분리된다.
• 주요 피크와 저분자량 집합체에 대한 탈결정화 스펙트럼에서 고밀도 정확성으로 당형태를 식별할 수 있다.

응용 분야

• SEC-HRMS는 단일클론항체의 기본 시퀀스 및 당형태 확인, 그리고 디머와 다른 고분자량 종류의 확인에 유용하다.
• NIST mAb RM 8671과 같은 표준물질을 사용한 방법 개발에서 중요한 역할을 한다.

결론 및 권장사항

SEC-HRMS는 생물제약 분야에서 바이오로직스의 고차 구조를 특성화하는 강력한 기술이다. 이 문서에서는 NIST mAb RM 8671에 대한 SEC-HRMS 분석을 통해 우수한 피크 형태와 당형태 식별 정확성을 보여주었다. 향후 연구는 다양한 생물분자에 대해 더 많은 데이터를 제공할 것으로 기대된다.

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