합성 올리고뉴클레오타이드 LC-MS 분석:
BioTi™ 하드웨어를 통한 피크 분리능 및 감도 극대화 가이드
합성 올리고뉴클레오타이드(Oligonucleotide) 분석 중 발생하는 피크 끌림, 감도 저하, 그리고 원인 모를 이봉형(Bimodal) 피크로 고민하고 계셨나요? 이번 어플리케이션 자료에서는 컬럼 하드웨어가 LC-MS 데이터 품질에 미치는 결정적인 차이를 분석 전문가의 시각으로 풀어드립니다.
30-second Summary: 분석 핵심 성과
- 비특이적 흡착 원천 차단: BioTi™(멀티 레이어 티타늄) 하드웨어를 사용하여 스테인리스 스틸(SS) 금속 이온에 의한 올리고의 킬레이션(Chelation) 현상을 완벽하게 방지합니다.
- 분석 감도 10배(10x) 향상: Nusinersen 분석 시, 동일한 충전물을 사용하더라도 하드웨어 교체만으로 10배 이상의 감도 차이를 확인했습니다.
- 데이터 신뢰도 확보: siRNA 분석 시 SS 컬럼에서 나타나는 가짜 피크(Bimodal peak)를 제거하고, 정교한 분리능과 재현성을 제공합니다.
Official Data vs. Columnpia Insight
제조사 공식 데이터와 컬럼피아 전문가의 실무 통찰을 비교하여 분석합니다.
| 구분 | 제조사 공식 데이터 (Phenomenex) | Columnpia 실무 Insight 💡 |
|---|---|---|
| 핵심 이슈 | SS 하드웨어의 금속 이온과 올리고 인산 뼈대의 상호작용. | 단순 컬럼 세척(Conditioning)으로는 해결되지 않는 근본적인 '흡착' 문제입니다. |
| 해결책 | Bio-inert 특성을 가진 BioTi 하드웨어 적용. | MS 분석 시 이온화 저해를 최소화하기 위해 낮은 농도의 IP 시약 사용이 가능해집니다. |
| 주요 성과 | 10배 높은 감도 및 피크 모양 개선. | 고가의 올리고 샘플 손실을 최소화하여 정량 분석의 정확도를 비약적으로 높입니다. |
킬레이션(Chelation)Visual Aid 🧲
올리고뉴클레오타이드의 인산 뼈대가 컬럼 벽면의 금속 이온에 자석처럼 달라붙는 현상입니다. 이로 인해 분석 물질이 검출기까지 도달하지 못하거나 늦게 나와 피크가 뭉개집니다.
BioTi™ 하드웨어Visual Aid 🛝
컬럼 내부를 티타늄으로 특수 처리하여 미끄럼틀처럼 올리고가 걸림 없이 매끄럽게 통과하도록 만든 '바이오 비활성(Bio-inert)' 경로입니다.
Experimental Conditions & Results
| Column Comparison | Biozen 2.6 µm Oligo (BioTi) vs. Legacy 2.6 µm Oligo (Stainless Steel) |
| Mobile Phase | TEA or Hexylamine + HFIP (Hexafluoro-2-propanol) |
| Temperature | 55°C (High Temp Recommended) |
| Detector | SCIEX® TripleTOF® 6600 (LC-MS) |
Data. 크로마토그램 분석 데이터
Figure 1.
siRNA on a Clarity™ 2.6 µm Oligo-XT Column (Standard Stainless Steel Hardware)
Figure 2.
siRNA on a Biozen™ 2.6 µm Oligo Column (BioTi™ Bio-inert Hardware).
Figure 3.
Nusinersen on Biozen 2.6 µm Oligo Column (Bio-inert) Compared to Clarity 2.6 µm Oligo-XT Column (Stainless Steel).
데이터 해석 및 실무 제언
전통적인 스테인리스 스틸 컬럼을 사용할 경우, 올리고뉴클레오타이드의 음이온 성질이 금속 표면과 반응하여 데이터 해석에 혼란을 주는 아티팩트(Artifact)를 생성합니다.Biozen BioTi 컬럼은 이러한 비특이적 상호작용을 차단하여, 낮은 농도의 샘플에서도 일관된 감도와 높은 회수율을 보장합니다.특히 MS 분석 시 감도 향상은 저농도 불순물 확인에 필수적입니다.
전문가 제언 3단계: 성공적인 올리고 분석을 위하여
01하드웨어 우선 선택
올리고 분석 시에는 충전물뿐만 아니라 반드시 Bio-inert(BioTi) 하드웨어인지를 먼저 확인하십시오.
02IP 시약의 최적화
MS 감도를 높이고 싶다면, BioTi 컬럼을 활용해 HFIP와 이온 페어링 시약의 농도를 낮추는 전략을 취하십시오.
03시스템 비활성화
컬럼뿐만 아니라 LC 라인 전체에서 금속 노출을 최소화하면 더욱 완벽한 결과를 얻을 수 있습니다.
참고 자료 및 원문
Phenomenex AN-1159 The Effect of Column Hardware on the Analysis of Synthetic Oligonucleotides by LC-MS
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