공식 데이터 vs Columnpia Insight
| 항목 | 공식 데이터 (Phenomenex) | Columnpia Insight |
|---|---|---|
| 분석 시간 | 12분 이내 분리 | 신속한 샘플 스크리닝 가능 |
| 피크 대칭성 | 비대칭성 개선 | 40% 더 날카로운 피크로 정량 정확도 향상 |
| 분석 환경 | 친수성 고정상 | 네이티브 상태 유지로 데이터 왜곡 방지 |
The Interpreter: 친절한 기술 해설
영어 원문
Inert Surface"펩타이드가 달라붙지 않는 비활성 다이올 코팅"
소수성 펩타이드는 일반적인 컬럼 표면에 끈적하게 달라붙어(흡착) 피크가 넓게 퍼지곤 합니다.Biozen dSEC-1은 마치 매끈한 구슬처럼 다이올(Diol) 코팅 처리가 되어 있어, 시료가 묻어나지 않고 깔끔하게 빠져나와 날카롭고 정확한 피크를 만들어냅니다.
영어 원문
High Resolution"작은 차이가 만드는 압도적 해상도"
리라글루타이드는 3.75kDa의 작은 분자입니다. 너무 큰 구멍(Pore)을 가진 컬럼은 이 작은 차이를 구분하지 못합니다.90Å의 최적화된 기공 크기는 리라글루타이드 단량체와 응집체의 미세한 크기 차이를 명확하게 걸러내어 완벽한 분리를 실현합니다.
실험 데이터 및 결과
LC Conditions
Waters® ACQUITY® UPLC
- Column
- Biozen™ 1.6 µm dSEC-1, 90 Å
- Mobile Phase
- (60:40) 1X PBS : Acetonitrile
- Flow/Temp
- 0.2 mL/min @ 40°C
- Detection
- UV @ 280 nm
분석 포인트
Liraglutide는 소수성이 강해 일반 SEC 조건에서는 컬럼 흡착이 발생합니다. 본 실험에서는 40% 아세토나이트릴을 사용하여 소수성 상호작용을 억제하면서도, Biozen dSEC-1의 불활성 표면 덕분에 추가적인 산성 변성제 없이 깔끔한 분리가 가능했습니다.
그림: Biozen dSEC-1을 이용한 리라글루타이드 단량체 및 응집체 분리 양상 (Original vs Stressed)
Table 2. 정량 분석 결과 (Resolution & Asymmetry)
| Sample | Species | Rel. Area (%) | Resolution | Tailing Factor |
|---|---|---|---|---|
| 빛 노출 전 (Original) | Monomer | 99.0% | 1.96 | 1.53 |
| Aggregates | 1.0% | - | - | |
| 빛 노출 후 (Stressed) | Monomer | 94.7% | 1.56 | 1.47 |
| Aggregates | 5.3% | - | - |
전문가 제언: 성공적인 분석을 위한 3단계
01
유기 용매 비율 최적화
리라글루타이드의 소수성 상호작용을 제어하기 위해 40% 수준의 아세토나이트릴 사용을 권장합니다.
02
90Å 기공 크기 선택
응집체와 단량체의 미세한 크기 차이를 분리하기 위해서는 3.75kDa 분자량에 최적화된 90Å 기공이 필수입니다.
03
컬럼 케어 루틴
분석 직후에는 반드시 유기 용매 비율을 낮춘 세척 용매로 컬럼을 씻어주어 수명을 연장하세요.
참고 자료 및 원문
App Note:
[TN-1394] Aggregate Analysis of Liraglutide Using Biozen dSEC-1원문 보기