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Analysis of IdeS Digested Monoclonal Antibody Fragments.PDF

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2025년 5월 6일 오전 10:55

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Analysis of IdeS Digested Monoclonal Antibody Fragments.PDF

분야: 바이오제약

소개

이 문서는 사이트 특이적 캐스테인 프로테아제인 IdeS를 사용하여 단일클론 항체(mAb)의 분해 산물 분석에 대한 내용을 다룹니다. 이 방법은 mAb의 순도 분석에서 중요한 역할을 하며, 특히 Fc 및 Fab'2 조각의 특성을 더 잘 이해하는 데 도움이 됩니다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

컬럼: bioZen 2.6 µm WidePore C4
Dimensions: 100 x 2.1 mm
Part No.: 00D-4786-AN
이동상 A: 0.1 % TFA in Water
이동상 B: 0.1 % TFA in Acetonitrile
Gradient Program: 30-40% B in 5 minutes (Fig 1-2)
유속: 0.8 mL/min
온도: 80°C
Detection: UV @ 214 nm
주입량: Infliximab, as indicated (0.5 mg/mL), Figures 1

핵심 기술 요소

사이트 특이적 캐스테인 프로테아제 IdeS를 사용하여 mAb의 Fc 및 Fab'2 조각을 분리하고 분석합니다.
이동상과 고정상을 이용한 HPLC 방법으로 mAb의 다양한 변형체(예: 라이신, deamidated variants)를 분리할 수 있습니다.
IdeS 소화 후 추가적인 환원 처리로 더 작은 조각(Fd' 및 light chain)을 얻어 Fab 영역의 다양성을 이해합니다.

응용 분야

mAb 순도 분석
항체 변형체의 특성 분석

결론 및 권장사항

IdeS를 사용한 단일클론 항체 조각 분석은 항체의 다양한 변형체와 Fc, Fab'2 영역을 더 잘 이해하는 데 중요한 도구입니다. 추가적인 환원 처리는 Fab 영역의 다양성을 더욱 자세히 파악할 수 있게 합니다. 향후 연구에서는 이러한 방법론이 mAb의 질량 분석 및 특성화에 활용될 것으로 기대됩니다.

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