Purity Analysis for Intact Monoclonal Antibodies and Fragments.PDF

분야: 바이오제약

소개

본 문서는 단일클론항체(mAbs)의 순도 분석을 위한 역상 HPLC(RPLC) 기법에 대해 설명하고 있다. 이 방법은 빠른 분석 시간과 높은 분리능으로 인해 mAb의 다양한 변이형(산화물, 당형태, 리신 변이체 등)을 효과적으로 분리할 수 있으며, 후보 선택 및 최적화 단계부터 안정성 검증 방법 및 품질 관리까지 적용 가능하다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen 2.6 µm WidePore C4, 100 x 2.1 mm
• 이동상 A: 0.1 % TFA in Water
• 이동상 B: 0.1 % TFA in Acetonitrile
• 그라디언트 프로그램: 30-40% B in 5 minutes (Fig 1-2)
• 유속: 0.8 mL/min
• 온도: 80°C
• 검출기 설정: UV @ 280 nm
• 주입량: 2 µL NIST mAb, as indicated (0.5 mg/mL)

핵심 기술 요소

• 역상 HPLC는 단일클론항체의 순도 분석에 사용되는 간단하면서 높은 해상력을 갖춘 분석 기법이다.
• 플랫폼 방법을 통해 다양한 mAb를 효과적으로 분석할 수 있으며, 환경 변화에도 안정적이다.
• 항체의 중합체와 가벼운 체인 순도 분석뿐만 아니라 사이트 특이성 시스테인 프로테아제 사용으로 특정 영역(Fc 또는 Fab)에 대한 세부적인 변이체 캐릭터리제이션 및 정량화가 가능하다.

응용 분야

• 단일클론항체의 순도 분석을 위한 플랫폼 방법 개발.
• 화학적 감소나 효소 소화를 통해 생성된 프래그먼트의 순도 분석.

결론 및 권장사항

역상 HPLC는 단일클론항체와 그 프래그먼트의 순도 분석에 매우 효과적인 기법으로, 다양한 mAb 변이형을 높은 해상력으로 분리할 수 있다. 향후 연구에서는 특정 영역(Fc 또는 Fab)에 대한 세부적 캐릭터리제이션 및 정량화를 위한 사이트 특이성 시스테인 프로테아제의 활용을 고려해볼 만하다.

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