Charge Variant Analysis of Trastuzumab using a bioZen 6 µm WCX Column with a pH Gradient and Native MS Detection.PDF

분야: 바이오제약

소개

이 문서는 Trastuzumab의 전하 변형 분석을 위해 bioZen™ 6 µm WCX 컬럼과 pH 기울기 및 Native MS 검출기를 사용하는 방법에 대해 설명합니다. 이 연구에서는 단일클론 항체의 전하 이질성을 식별하기 위한 이온 교환 크로마토그래피의 활용을 보고하고 있습니다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen 6 µm WCX
• 차원:
  • UV 측정: 50 x 2.1 mm, Part No.: 00B-4777-AN
  • LC-MS/MS 조건: 250 x 2.1 mm, Part No.: 00G-4777-AN
• 이동상:
  • A: 20 mM Ammonium Acetate, pH 5.2
  • B: 5 mM Ammonium Acetate, pH 10.2
• 기울기:
  • UV 측정: 20-50 % in 5 min
  • LC-MS/MS 조건: 20-50 % in 25 min
• 유속:
  • UV 측정: 0.5 mL/min
  • LC-MS/MS 조건: 200 µL/min
• 온도: 30 °C
• 검출기:
  • UV 측정: UV @ 280 nm
  • LC-MS/MS 조건: QTOF (SCIEX® X500B)
• 표본: Trastuzumab, 50 µg

핵심 기술 요소

• 이온 교환 크로마토그래피는 단일클론 항체의 전하 이질성을 식별하는 강력한 방법이다.
• pH 기울기를 사용하여 생성된 휘발성 버퍼 시스템은 HEPES와 유사한 분리 결과를 제공한다.
• Native MS 검출기는 Trastuzumab의 주요 피크 글리코폼과 라이신 변형을 식별하는 데 효과적이다.

응용 분야

• 단일클론 항체의 전하 이질성 분석
• 고해상도 질량 분광법을 통한 세부적인 분석

결론 및 권장사항

이 연구는 Trastuzumab의 전하 변형 분석에서 pH 기울기와 Native MS 검출기를 사용하는 bioZen™ 6 µm WCX 컬럼의 효과를 보여주고 있습니다. 이 방법은 HEPES 버퍼 시스템과 유사한 결과를 제공하며, 향후 연구에서는 다양한 단일클론 항체에 대한 전하 변형 분석에서 이 기술을 확장할 수 있을 것으로 예상됩니다.

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