Effect of Flow Rate on Reversed Phase Separations of Monoclonal Antibodies using bioZen WidePore C4.PDF

분야: 바이오제약

소개

이 문서는 bioZen WidePore C4 컬럼을 사용한 유속 최적화에 대한 연구를 다룹니다. 특히, 단일클론 항체(mAbs)의 역상 분리에서 유속 변화가 어떻게 영향을 미치는지 조사하였습니다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen 2.6 µm WidePore C4
• 차수: 100 x 2.1 mm
• 이동상 A: Water with 0.1% TFA
• 이동상 B: Acetonitrile with 0.1% TFA
• 경사도: 6분 동안 25-45% B
• 유속: 실험에 따라 다름 (0.5 mL/min, 0.8 mL/min 등)
• 온도: 90 °C
• 검출기 설정: UV-Vis @ 280 nm 및 214 nm
• 샘플: NIST mAb (1 mg/mL)
• 주입량: 2 µL

핵심 기술 요소

• 유속을 증가시키면 단백질의 천천히 확산되는 문제를 해결하고, 피크 폭이 줄어들며 분리능이 향상됩니다.
• bioZen WidePore C4 컬럼은 표피 다공성 입자를 사용하여 대분자 물질에 대한 분석 성능을 개선합니다.
• 유속 증가로 인해 하중 사슬과 경사 사슬의 피크 폭이 감소하며, 특히 0.8 mL/min에서 가장 좋은 결과를 보입니다.

응용 분야

• 단일클론 항체(mAbs)의 정량 및 품질 확인을 위한 LC-UV 임피리티 분석.
• LC-MS를 사용한 주요 시퀀스 확인.

결론 및 권장사항

유속 증가로 인해 피크 폭이 줄어들고, 전체 크로마토그래픽 성능이 향상됩니다. 특히 하중 사슬과 경사 사슬의 분석에서 가장 효과적입니다. 그러나 0.6 mL/min에서는 예기치 않은 결과를 보일 수 있으므로 실험적으로 유속 변화에 따른 영향을 확인해야 합니다.

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