Optimizing Separation for Charge Variant Analysis (CVA) using Biozen 6 μm WCX- Salt versus pH Gradients.PDF

분야: 바이오제약

소개

이 문서는 바이오제약 분야에서 단백질의 전하 변형 분석(CVA)을 위한 최적화된 분리 방법에 대해 설명하고 있습니다. 특히 bioZen 6 µm WCX 컬럼을 사용한 염 농도 및 pH 경사 조건 하에서 다양한 항체(세투시맙, 트라스추마브, 인플릭시맙, 리툭시맙)의 전하 변형 분석에 초점을 맞춥니다.

실험 조건 (Experimental Conditions)

• 컬럼: bioZen 6 µm WCX
• 차원: 250 x 4.6 mm
• 유속: 1.0 mL/min
• 검출기 설정: UV @ 228 nm
• 온도: 30 °C
• 주입량: 15 µL

이동상 조건 (Mobile Phase Conditions)

| 방법 | Mobile Phase A | Mobile Phase B | 경사 프로파일 | |------|----------------|---------------|--------------| | 염 농도 경사 | 20 mM MES (pH 5.6) | 20 mM MES + 300 mM NaCl (pH 5.6) | 15-45% B in 30 min | | pH 경사 | CX-1 pH gradient buffer A (pH 5.6) | CX-1 pH Gradient Buffer B (pH 10.2) | 0-100% B in 20 min |

핵심 기술 요소

• 염 농도 경사와 pH 경사를 사용한 전하 변형 분석(CVA).
• bioZen WCX 컬럼은 다른 WCX 컬럼보다 효율적이고, 입자 기술과 BioTi™ 하드웨어를 결합하여 우수한 결과를 제공.
• 염 농도 경사에서는 이동상의 염 농도가 증가함에 따라 분리되며, pH 경사는 단백질의 pI에 근거해 분리.

응용 분야

• 세투시맙(Erbitux®), 트라스추마브(Herceptin®), 인플릭시맙(Remicade®), 리툭시맙(Rituxan®) 등의 항체의 전하 변형 분석.
• 염 농도 경사와 pH 경사를 사용한 다양한 단백질의 분리.

결론 및 권장사항

염 농도 경사와 pH 경사는 4가지 중성 항체(cetuximab, trastuzumab, infliximab, rituximab)의 전하 변형을 효과적으로 분리합니다. 각 방법은 다른 머무름 시간(retention time)을 제공하며, 염 농도 경사에서는 단백질의 pI가 아닌 접근 가능한 전하 수에 따라 분리됩니다. pH 경사는 단백질의 등전점(isoelectric point)에 근거해 분리를 수행합니다. 실험 조건과 결과는 각 항체별로 다르며, 이는 표면 전하 밀도와 관련이 있습니다.

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